小鼠纖維素酶(CE)elisa試劑盒代測(cè)實(shí)驗(yàn)步驟有哪些？

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小鼠纖維素酶(CE)elisa試劑盒代測(cè)（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法）使用說明書

僅供體外研究使用，不用于臨床診斷!

產(chǎn)品規(guī)格：96T/48T（可拆）

產(chǎn)品數(shù)量：咨詢

產(chǎn)品應(yīng)用：ELISA實(shí)驗(yàn)

產(chǎn)品貨期：現(xiàn)貨

有效期：6個(gè)月

保存條件：2-8℃

本公司的ELISA試劑盒，品質(zhì)高，靈敏度好，曲線漂亮，無效包退包換，還可提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，各種種屬、各種系列ELISA科研實(shí)驗(yàn)檢測(cè)試劑盒，詳情可來電咨詢我公司銷售人員或咨詢我公司在線客服QQ。

[樣本處理及要求]

1、血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?span lang="EN-US">-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2、血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?span lang="EN-US">-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3、組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測(cè)。

4、細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請(qǐng)1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?span lang="EN-US">-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注：標(biāo)本溶血會(huì)影響后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。

[試劑準(zhǔn)備]

小鼠纖維素酶(CE)elisa試劑盒代測(cè)從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

[操作步驟]

1、從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3、樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。

4、除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5、棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6、每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7、每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

[操作步驟]
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照隨貨說明書中圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。 
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。(小鼠纖維素酶(CE)elisa試劑盒代測(cè))

[售后]

試劑盒售后：本公司出售的試劑盒均保質(zhì)保量，質(zhì)量問題均可免費(fèi)退換，另提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)。
　  ★立足于科研沿，主營(yíng)ELISA試劑盒、抗體或抗原、血清、培養(yǎng)基等等各種科研試劑，滿足各大院校以及研究機(jī)構(gòu)在生物域的科研需求。

　　★完善的實(shí)驗(yàn)技術(shù)開發(fā)平臺(tái)，和成熟的試劑研發(fā)系統(tǒng)，并熟練掌握了各種酶聯(lián)技術(shù)。

　　★產(chǎn)品具有較強(qiáng)的穩(wěn)定性和較高的準(zhǔn)確性。

　　★ 面向?qū)W院、研究所、醫(yī)院、衛(wèi)生防疫注于生物技術(shù)研發(fā)的公司等單位的廣大客戶。

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原創(chuàng)作者：上海雙贏生物科技有限公司