iCAP 7000 Plus系列ICP-OES 簡化了工作流程,并實現(xiàn)了快速、低成本、痕量元素分析。Qtegra ISDS從樣品導入到生成報告和數(shù)據(jù)處理,為用戶量身定制工作流程。預優(yōu)化方法簡化甚至省去新方法建立過程。強大的方法開發(fā)工具意味著新用戶可以體驗方便、可靠的方法開發(fā),即便采用先進的配件,如激光燒蝕。兼容性硬件進樣裝置可快捷替換,氣路自動連接。簡單的日常維護采用專門的進樣系統(tǒng)和獨特的增強型耐基質(zhì)(EMT) 等離子體炬管設(shè)計。
iCAP 7000 Plus系列ICP-OES可以實現(xiàn)元素周期表中70多種元素的定性及精確定量分析,一次進樣就可以實現(xiàn)所有元素的測定,該產(chǎn)品在目前世界上同類產(chǎn)品中體積最小,分析速度最快。
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礦物油檢測儀、食品風味檢測儀、離子研磨儀、離子束切割系統(tǒng)、
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合金分析儀
中文名稱:大鼠一型C端前膠原( PICP)elisa試劑盒英文名稱: Rat PICP ELISA KIT
購買我公司任一款elisa試劑盒,均可享受免費代測服務。
大鼠一型C端前膠原( PICP)elisa試劑盒 實驗材料與試劑配制:1.儀器與材料:酶標儀(使用前預熱30分鐘),微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水,濾紙。2.緩沖液使用:加5ul的緩沖液于50ul的樣品中,如果樣品量不夠或者不確定,緩沖液和樣品的混合比例不要小于1:10即可。 混勻,靜置1小時備用(如果標本是血清或者血漿,此步驟忽略)。3.洗液的配制:按1:100的比例配制洗液備用。大鼠一型C端前膠原( PICP)elisa試劑盒樣品收集、處理及保存1.細胞培養(yǎng)上清:適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液,以1000×g離心15分鐘,收集上清。2.細胞:用PBS反復洗滌細胞3次,調(diào)整細胞濃度達到104-106/ml 左右,通過反復凍融,使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,或者細胞超聲粉碎,離心取上清液檢測。3.血清:在室溫下,血液自然凝固,以1000×g離心15分鐘,取上清待測。|4.血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置10-20 分鐘后,以1000×g離心15分鐘,收集上 清。5.體液:包括胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,以1000×g離心15分鐘,收集上清。6.組織標本:切取組織標本,稱取重量0.5mg,加入500ul的PBS,用手工或勻漿器,或超聲破碎儀將標本勻漿,以2000-3000 rmp離心20 分鐘,收集上清進行檢測。7.樣品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。8.保存:如果樣品不能立即檢測,應將其分裝,-70 ℃保存,避免反復冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。大鼠一型C端前膠原( PICP)elisa試劑盒 操作步驟:1.取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置 30分鐘。2.分組:取出 96孔板,根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標準 品組(6個濃度)、空白孔、待測樣品組。注:為減少實驗誤差,保證準確性,建議設(shè)置復孔。3.加樣:依照標準品的順序分別加入 100ul的標準品溶液于空白微孔中;空白對照孔加入 100ul的蒸餾水;其余微孔中加入100ul的待測樣本。4.加酶標溶液:標準品組、待測樣本組各孔中加入 50ul的酶標溶液(空白對照孔除外)。5.溫育:酶標板用封板紙密封后,放入濕盒內(nèi)于 37℃恒溫孵育1小時。6.洗板:用稀釋后的洗滌液注滿每孔,靜置15-30s,充分清洗酶標板 5次,用吸水紙徹底拍干。7.顯色:各孔加入顯色劑A液50ul后,再加入顯色劑B液50ul。8.終止:25-37℃下避光反應10-15分鐘,加入50ul終止液。9.讀板:在450nm波長讀取各孔的OD 值。 注:讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡,讀板時間控制在終止反應后的 30分鐘內(nèi),以免影響準確性。大鼠一型C端前膠原( PICP)elisa試劑盒 注意事項:1.實驗操作中必須使用一次性吸頭,避免交叉污染。2.加樣:加樣時,要控制加樣速度,避免第一孔與最后一孔間的時間間隔過大,否則將會導致不同的預孵育時間,從而影響實驗的準確性以及重復性。3.孵育:嚴格按照說明書上規(guī)定的孵育時間和溫度進行。4.反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化,如果顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應。5.建議實驗前預測樣品含量,如樣品濃度過高,應對樣品進行稀釋,計算結(jié)果時乘以相應的稀釋倍數(shù)。6.建議使用本試劑盒時先做預實驗(即先做標準曲線,試用幾個標本),如果對本試劑盒有任何疑問,可和所購經(jīng)銷商聯(lián)系,如果因運輸過程導致試劑盒失效,可要求調(diào)換,但概不承擔產(chǎn)品本身以外的任何損失。大鼠一型C端前膠原( PICP)elisa試劑盒 安全性1. 避免人體直接接觸顯色劑A、B和終止液。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。2. 實驗中不要進食、抽煙或使用化妝品。3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。大鼠一型C端前膠原( PICP)elisa試劑盒 保存條件及有效期1.試劑盒保存:2-8℃2.有效期:6個月
大鼠一型C端前膠原( PICP)elisa試劑盒 采購
中文名稱:大鼠一型C端前膠原( PICP)ELISA Kit
英文名稱:Rat PICP ELISA Kit
規(guī)格:96T/48T
保存條件:2-8℃
有效期:6個月
產(chǎn)地:國產(chǎn)/進口
大鼠一型C端前膠原( PICP)ELISA Kit 用途:
用于定量檢測血清、血漿及相關(guān)液體樣本中大鼠一型C端前膠原( PICP)的含量。僅供科學研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗。
大鼠一型C端前膠原( PICP)ELISA Kit 注意事項:
①試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
②濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
③各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
④請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
⑤封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
⑥底物請避光保存。
⑦嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
⑧所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
⑨本試劑不同批號組分不得混用。
⑩如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
大鼠一型C端前膠原( PICP)ELISA Kit 相關(guān)產(chǎn)品:
雞轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1) Chicken Transforming Growth factor β1,TGF-β1
駱駝脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2) Camel lipoprotein-associated phospholipase A2,Lp-PL-A2
馬主要組織相容性復合體(MHC/ELA) Equine major histocompatibility complex,MHC/ELA
人白介素18(IL-18) Human Interleukin 18,IL-18
雞血小板因子4(PF-4/CXCL4) Chicken Platelet Factor 4,PF-4
猴β2微球蛋白(BMG/β2-MG) Monkey β2-microglobulin,BMG/β2-MG
雞層連蛋白/板層素(LN) Chicken Laminin,LN
鴨抗凝血素抗體(aPT1/aPT2) Duck anti-prothrombins antibodies,aPT1/aPT2
綿羊胰島素樣生長因子1(IGF-1) Sheep Insulin-Like Growth Factor-I,IGF-I
人血管內(nèi)皮細胞生長因子D(VEGF-D)Human Vascular Endothelial cell Growth Factor D,VEGF-D
雞白血病病毒抗原(ALV-AG) Chicken Avian Leukosis Virus AG,ALV-AG
猴子巨噬細胞移動抑制因子(MIF) Monkey Macrophage Migration Inhibitory Factor,MIF
人單核細胞趨化蛋白2(MCP-2/CCL8) Human monocyte chemotactic protein 2,MCP-2
人肽基脯氨酰順反異構(gòu)酶(PPI) Human Peptidyl prolyl cis/trans isomerase,PPI
人多巴胺-β羥化酶(DBH) Human dopamine-β-hydroxylase,DBH
小鼠過敏毒素/補體片斷4a(C4a) Mouse Complement fragment 4a,C4a
小鼠糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB Mouse Glycogen phosphorylase BB,GP-BB
小鼠血紅素氧合酶2(HO-2) Mouse heme oxygenase 2,HO-2
小鼠抗IgE受體抗體 Mouse anti-IgE receptor antibody
小鼠胃腸癌標志物CA199 Mouse Gastrointestinalcancer Marker-CA199
全國咨詢熱線:010-56429247 13488645491 QQ:774226171 聯(lián)系人:梁經(jīng)理
大鼠一型C端前膠原( PICP)ELISA檢測試劑盒價格 Rat PICP ELISA KIT 北京方程生物 elisa實驗代測
Elisa實驗 自備物品:1. 37 ℃ 恒溫箱2. 標準規(guī)格酶標儀3. 精密移液器及一次性吸頭4. 蒸餾水5. 一次性試管6. 吸水紙
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大鼠一型C端前膠原( PICP)ELISA檢測試劑盒價格 Rat PICP ELISA KIT 北京方程生物 elisa實驗代測
關(guān)鍵詞: 大鼠一型C端前膠原,大鼠 PICP,北京大鼠elisa價格 說明書
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ICP 蠕動泵管 參數(shù):
Metric I.D. Wall mm Description Colour Code 0.13mm 0.91 Orange/Black 0.19mm 0.91 Orange/Red 0.25mm 0.91 Orange/Blue 0.28mm 0.91 White/Blue 0.31mm 0.91 Red/Blue 0.33mm 0.91 Brown/Blue 0.36mm 0.91 Brown/Black 0.38mm 0.91 Orange/Green 0.44mm 0.91 Green/Yellow 0.51mm 0.91 Orange/Yellow 0.57mm 0.91 White/Yellow 0.64mm 0.91 Orange/White 0.76mm 0.86 Black/Black 0.89mm 0.86 Orange/Orange 0.95mm 0.86 White/Black 1.02mm 0.86 White/White 1.09mm 0.86 White/Red 1.14mm 0.86 Red/Red 1.22mm 0.86 Red/Grey 1.30mm 0.86 Grey/Grey 1.42mm 0.86 Yellow/Yellow 1.52mm 0.86 Yellow/Blue 1.65mm 0.86 Blue/Blue 1.75mm 0.86 Blue/Green 1.85mm 0.86 Green/Green 2.06mm 0.86 Purple/Purple 2.29mm 0.86 Purple/Black 2.54mm 0.86 Purple/Orange 2.79mm 0.86 Purple/White 3.18mm 0.86 Black/White
PVC 、Silicone 、Solva® Tubes 、Viton® Tubes 、TYGON R-3603適用于蠕動泵泵管和各種理化儀器設(shè)備連接,具有良好的氣體輸送和排水管道功能。
小鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)酶聯(lián)免疫試劑盒價格
l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關(guān)液體樣本中小鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)的含量。
l 有效期:6個月
l 保存條件:2-8℃
l 本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷
實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被小鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
樣本處理及要求
1. 血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
3. 組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。
4. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。注:標本溶血會影響最后檢測結(jié)果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
標本處理
1. 本公司只對試劑盒本身負責,不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責,請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,預留充足的樣本。
2. 實驗前應預測標本含量,如果標本濃度過高,應對標本進行稀釋,使稀釋后的標本符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數(shù)。標本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。
3. 若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中,建議進行預實驗驗證其有效性,并注意留存樣本。
4. 使用化學裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學物質(zhì)的引入導致ELISA實驗結(jié)果偏差。
5. 若樣本為細胞培養(yǎng)上清,因該類樣本干擾因素較多,如:細胞狀態(tài)、細胞數(shù)量、采樣時間等,所以可能存在檢測不出的情況。
6. 某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配,而不被檢測出。
7. 建議使用新鮮樣本,保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導致實驗結(jié)果偏差。
需要而未提供的試劑和器材
1. 酶標儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
試劑盒組成
名稱 | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
微孔酶標板 | 8孔×12條 | 8孔×6條 | 無 |
標準品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 無 |
樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無 |
檢測抗體-HRP | 10mL | 5mL | 無 |
20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說明書進行稀釋 |
底物A | 6mL | 3mL | 無 |
底物B | 6mL | 3mL | 無 |
終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
封板膜 | 2張 | 2張 | 無 |
說明書 | 1份 | 1份 | 無 |
自封袋 | 1個 | 1個 | 無 |
備注:
1. 標準品濃度依次為:16、8、4、2、1、0 ng/mL
2. 經(jīng)過大量正常標本檢驗,標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過最大標準品濃度時,可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。
注意事項
1. 嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2. 洗板不正確可以導致不準確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍的底物液不能使用。
5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。
6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。
9. 不能使用過期產(chǎn)品。
10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
試劑準備
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡后方可使用。
20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。
實驗結(jié)果計算
以所測標準品的OD值為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪制標準曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。
試劑盒性能
1. 檢測范圍:0.5 ng/mL – 16 ng/mL。
2. 靈敏度:最低檢測濃度小于0.1 ng/mL。
3. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應。
4. 重復性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,板間變異系數(shù)小于15% 。
說明
1. 由于現(xiàn)有條件及科學技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析,本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風險。
2. 最終的實驗結(jié)果與試劑的有效性、實驗者的相關(guān)操作以及當時的實驗環(huán)境密切相關(guān),請務必準備充足的標本備份。
3. 不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別,如:檢測限、靈敏度以及顯色時間等,請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進行實驗操作,網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。
4. 只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果,不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到最佳的檢測結(jié)果。
問題解答
若實驗效果不好,請及時對顯色結(jié)果拍照,保留所用板條及未使用試劑,并妥善保存,然后聯(lián)系我公司技術(shù)支持為您解決問題。同時您也可以參考以下資料:
問題 | 可能原因 | 解決方案 |
標準曲線差 | 吸取及洗滌不充分 | 充分的吸取及洗滌 |
移液不精確 | 檢查和校正移液器 | |
精密度低 | 洗滌不充分 | 按說明書要求充分洗滌和浸泡 |
混勻不充分和吸取試劑不足 | 充分混勻和吸取試劑 | |
重復利用吸頭、容器和覆膜 | 使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的容器和覆膜 | |
加樣不精確 | 檢查和校正移液器 | |
O.D值低 | 每孔加的試劑量不精確 | 校正移液器,精確加入試劑 |
溫育時間不正確 | 保證充足的溫育時間 | |
溫育溫度不正確 | 試劑要平衡至室溫并保證準確的溫育溫度 | |
酶標記物或底物失效 | 通過混合酶標記物和底物,顏色應迅速顯現(xiàn)來檢查 | |
沒有加入終止液 | 按照說明書實驗操作步驟加入終止液 | |
超出讀數(shù)時間讀數(shù) | 在說明書推薦的讀數(shù)時間內(nèi)讀數(shù) | |
樣本值 | 不正確的樣本儲存方式 | 正確儲存樣本,使用新鮮樣本進行實驗 |
不正確的樣本收集和處理方法 | 采取正確的樣本收集和處理方法 | |
待測物質(zhì)在樣本中含量低 | 使用新鮮樣本,重復實驗 |
小鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)ELISA試劑盒
l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關(guān)液體樣本中小鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)的含量。
l 有效期:6個月
l 保存條件:2-8℃
l 本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷
實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被小鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
樣本處理及要求
1. 血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
3. 組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。
4. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。注:標本溶血會影響最后檢測結(jié)果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
標本處理
1. 本公司只對試劑盒本身負責,不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責,請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,預留充足的樣本。
2. 實驗前應預測標本含量,如果標本濃度過高,應對標本進行稀釋,使稀釋后的標本符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數(shù)。標本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。
3. 若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中,建議進行預實驗驗證其有效性,并注意留存樣本。
4. 使用化學裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學物質(zhì)的引入導致ELISA實驗結(jié)果偏差。
5. 若樣本為細胞培養(yǎng)上清,因該類樣本干擾因素較多,如:細胞狀態(tài)、細胞數(shù)量、采樣時間等,所以可能存在檢測不出的情況。
6. 某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配,而不被檢測出。
7. 建議使用新鮮樣本,保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導致實驗結(jié)果偏差。
需要而未提供的試劑和器材
1. 酶標儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
試劑盒組成
名稱 | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
微孔酶標板 | 8孔×12條 | 8孔×6條 | 無 |
標準品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 無 |
樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無 |
檢測抗體-HRP | 10mL | 5mL | 無 |
20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說明書進行稀釋 |
底物A | 6mL | 3mL | 無 |
底物B | 6mL | 3mL | 無 |
終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
封板膜 | 2張 | 2張 | 無 |
說明書 | 1份 | 1份 | 無 |
自封袋 | 1個 | 1個 | 無 |
備注:
1. 標準品濃度:詳情來電咨詢
2. 經(jīng)過大量正常標本檢驗,標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過最大標準品濃度時,可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。
注意事項
1. 嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2. 洗板不正確可以導致不準確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍的底物液不能使用。
5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。
6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。
9. 不能使用過期產(chǎn)品。
10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
試劑準備
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡后方可使用。
20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
操作流程
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。
實驗結(jié)果計算
以所測標準品的OD值為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪制標準曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。
說明
1. 由于現(xiàn)有條件及科學技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析,本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風險。
2. 最終的實驗結(jié)果與試劑的有效性、實驗者的相關(guān)操作以及當時的實驗環(huán)境密切相關(guān),請務必準備充足的標本備份。
3. 不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別,如:檢測限、靈敏度以及顯色時間等,請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進行實驗操作,網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。
4. 只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果,不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到最佳的檢測結(jié)果。
常見問題
若實驗效果不好,請及時對顯色結(jié)果拍照,保留所用板條及未使用試劑,并妥善保存,然后聯(lián)系我公司技術(shù)支持為您解決問題。同時您也可以參考以下資料:
問題 | 可能原因 | 解決方案 |
標準曲線差 | 吸取及洗滌不充分 | 充分的吸取及洗滌 |
移液不精確 | 檢查和校正移液器 | |
精密度低 | 洗滌不充分 | 按說明書要求充分洗滌和浸泡 |
混勻不充分和吸取試劑不足 | 充分混勻和吸取試劑 | |
重復利用吸頭、容器和覆膜 | 使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的容器和覆膜 | |
加樣不精確 | 檢查和校正移液器 | |
O.D值低 | 每孔加的試劑量不精確 | 校正移液器,精確加入試劑 |
溫育時間不正確 | 保證充足的溫育時間 | |
溫育溫度不正確 | 試劑要平衡至室溫并保證準確的溫育溫度 | |
酶標記物或底物失效 | 通過混合酶標記物和底物,顏色應迅速顯現(xiàn)來檢查 | |
沒有加入終止液 | 按照說明書實驗操作步驟加入終止液 | |
超出讀數(shù)時間讀數(shù) | 在說明書推薦的讀數(shù)時間內(nèi)讀數(shù) | |
樣本值 | 不正確的樣本儲存方式 | 正確儲存樣本,使用新鮮樣本進行實驗 |
不正確的樣本收集和處理方法 | 采取正確的樣本收集和處理方法 | |
待測物質(zhì)在樣本中含量低 | 使用新鮮樣本,重復實驗 |
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